авторефераты диссертаций www.z-pdf.ru
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
 

На правах рукописи

ЖЕГЛОВА

Мария Юрьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭПИТЕЛИЯ ШЕЙКИ МАТКИ В

ЭМБРИОНАЛЬНОМ ГИСТОГЕНЕЗЕ И ПРИ ЭКТРОПИОНЕ У ЧЕЛОВЕКА

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология (медицинские науки)

14.01.01- акушерство и гинекология

А В Т О Р Е Ф Е Р А Т

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург – 2015

Работа

выполнена

на

кафедре

акушерства

и

гинекологии

имени

С.Н.

Давыдова

государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального

образования

«Северо-Западный

государственный

медицинский

университет

им.

И.И.

Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Одинцова Ирина Алексеевна

доктор медицинских наук, профессор Татарова Нина Александровна

Официальные оппоненты:

Боровая Татьяна Геннадьевна - доктор медицинских наук, член-корреспондент Российской

академии

наук,

профессор,

Федеральное

государственное

бюджетное

учреждение

«Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им.

Почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации (г.

Москва), лаборатория анатомии микроорганизмов, главный научный сотрудник

Дубровина Светлана Олеговна - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное

государственное бюджетное учреждение «Ростовский научно-исследовательский институт

акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, акушерско -

гинекологический отдел, главный научный сотрудник

Ведущая организация: государственное бюджетное образовательное учреждение высшего

профессионального образования «Северный государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской Федерации (г. Архангельск)

Защита диссертации состоится

«__»_______ 2016 года в ___ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.087.01 при государственном образовательном бюджетном

учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный

педиатрический медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской

Федерации (194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО СПбГПМУ Минздрава России

по адресу: 194100, Санкт-Петербург, ул. Кантемировская, д. 16 и на официальном сайте ГБОУ

ВПО СПбГПМУ Минздрава России http://gpma.ru

Автореферат разослан

« »

201_ г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

2

Кульбах Ольга Станиславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования

Основные этапы эмбриогенеза женской половой системы представлены в классических

монографиях, написанных специалистами-эмбриологами и ставших уже библиографической

редкостью (Пэттен Б.М., 1959; Кнорре А.Г., 1967; Волкова О.В., Пекарский М.И., 1976; Фалин

Л.И., 1976). В классических гистологических исследованиях отмечается чрезвычайная

сложность происходящих в ходе пренатального развития морфогенетических преобразований и

механизмов регуляции женской половой системы (Волкова О.В., Боровая Т.Г.,1999). В этом

кроется одна из причин существования многих противоречий и спорных вопросов по этой теме.

К ним относятся, например, дискуссия о том, каким образом формируется «стык»

морфологически и генетически различных эпителиев слизистой оболочки матки и влагалища,

какова роль так называемых резервных клеток в возникновении патологических процессов

женской репродуктивной системы, существуют ли генетически обусловленные предпосылки

для развития доброкачественных и злокачественных заболеваний женской половой системы

(Молдавская А.А., Федорова Н.Н., 2000; Валькович Э.И., 2003; Kurita T., 2011).

При разработке проблемных вопросов гистогенеза тканей с различными камбиальными

свойствами применяют разные методологические и методические подходы (Хлопин Н.Г., 1946;

Заварзин А.А., 1976; Данилов Р.К., 1994; Одинцова И.А., 2015). Вопросы пролиферации и

дивергентной дифференцировки в эмбриональном и постнатальном гистогенезе, а также в

реактивно измененных условиях у экспериментальных животных и человека успешно

разрабатываются коллективами отечественных гистологических научных школ (Верин В.К.,

2011; Данилов Р.К., Боровая Т.Г., 2011; Павлов А.В., 2011; Одинцова И.А., 2015; Гансбургский

А.Н., 2015; Зашихин А.Л., 2015; Стадников А.А., 2015).

Согласно данным З.Н. Макиян (2010), врожденные пороки развития женских половых

органов

составляют

14%

всех

врожденных

аномалий,

а

становление

и

тканевая

дифференцировка женской половой системы протекают в неразрывной связи с выделительной

системой. Большинство исследователей признают факт сочетания аномалий развития матки и

влагалища с пороками развития или другой патологией мочевыделительной системы (Адамян

Л.В., Макиян З.Н., Богданова Е.А., 2001; Robboy S.J., Bernhardt P.F., 1994; Moore K.L., Persaud

T.V.N., 2002; Kurita T., 2008). Изучение разновидностей эпителиальных тканей с учетом

гистологических закономерностей вызывает интерес как у морфологов, так и у клиницистов

(Кобозева Н.В., Кузнецова М.Н., Гуркин Ю.А., 1981; Никитин А.И., 1997, 2006; Татарова Н.А.,

2011; Дубровина С.О., 2015).

3

Несмотря на имеющийся фактический

материал, в научной литературе нет

однозначного мнения об особенностях развития клеточного материала урогенитальной

бластемы, отсутствует характеристика процессов пролиферации и дифференцировки эпителия

слизистой

оболочки

маточно-влагалищного

тракта

человека

в

различные

периоды

эмбриогенеза.

Выяснение гистогенетических основ развития эпителиальной выстилки органов

женского полового тракта является актуальным не только в теоретическом, но и в практическом

плане для грамотной и объективной микроскопической диагностики ее реактивных изменений.

Выводы некоторых современных авторов (Новик В.И., 2012; Malpica A., 2009) о

тканевой природе «резервных клеток» и их полипотентных свойствах противоречат

фундаментальному учению о генетической детерминации эмбриональных источников развития

клеток и тканей у позвоночных и человека (Хлопин Н.Г., 1946). Требует дальнейшего

исследования и уточнения процесс метаплазии. До настоящего времени спорным остается

вопрос об участии в гистогенетических процессах такого явления как меторизис. Отсутствует

комплексная характеристика основных закономерностей эмбрионального гистогенеза в

эпителиальных тканях выстилки женского полового тракта, их взаимодействия и формирования

границ и «стыка» и, как следствие, до сих пор не существует надежной программы ранней

диагностики рака шейки матки (Нейштадт Э.Л., Крулевский В.А., 2012; Naucler P., Ryd W.,

2007).

Одним из часто встречающихся реактивных состояний эпителия шейки матки является

эктропион (Кудинов С.В. и соавт., 2007; Новик В.И., 2012). Согласно общепринятым

сведениям, эктропион - это выпячивание во влагалище покровной ткани канала шейки матки,

которая по своему виду и свойствам отличается от ткани, покрывающей видимую при

обследовании акушерами-гинекологами шейку матки. Светооптическая характеристика и

описание кольпоскопической картины эктропиона в общих чертах представлены в работах Г.

Бауэр (2002), Б. Апгар, Г. Броцман, М. Шпицер (2012), но их трактовка механизмов

формирования «псевдоэрозии» не всегда однозначна. В этой связи необходимо уточнение

клеточного состава эпителиоцитов и гистологическая оценка реактивных изменений с учетом

данных иммуноцитохимии.

Таким образом, имеется ряд спорных и малоисследованных вопросов по пролиферации,

дифференцировке и реактивности эпителиоцитов слизистой оболочки матки и влагалища,

изучение которых будет способствовать раскрытию сущности патологических процессов,

происходящих в эпителиальной выстилке указанных органов. Решение этих вопросов является

актуальным не только для теоретического понимания базисных процессов гистогенеза, но и

4

необходимо для уточнения механизмов дезадаптаций и патологических изменений генетически

и морфологически различных эпителиальных тканей.

Цель работы: выявить морфофункциональные особенности

гисто- и органогенеза

маточно-влагалищного

тракта

у

человека

в

пренатальном

периоде

онтогенеза

и

охарактеризовать реактивные изменения эпителия шейки матки при кольпоскопической

картине эктропиона у женщин репродуктивного возраста.

Задачи исследования:

1.

Уточнить основные процессы развития производных урогенитальной бластемы.

2.

Охарактеризовать последовательное развитие эпителиальной выстилки маточно-

влагалищного тракта человека в I, II и III триместрах беременности.

3.

Оценить процессы пролиферации и дифференциации эпителиоцитов маточно-

влагалищного тракта в пренатальном периоде онтогенеза человека.

4.

Выявить реактивные изменения эпителиальной выстилки шейки матки в мазке на

онкоцитологию при кольпоскопической картине эктропиона у женщин репродуктивного

возраста.

Научная новизна работы

Впервые показано участие эпителиоцитов мочеполового пространства в формировании

связи полости матки с внешней средой (с эпителиоцитами влагалища). Уточнены и

охарактеризованы основные производные урогенитальной бластемы (мезонефральный проток и

парамезонефральный проток) на ранних стадиях эмбриогенеза человека.

С помощью комплекса методов гистологического исследования (морфометрического,

цитофотометрического, гистохимии, иммуногистохимии и иммуноцитохимии)

впервые

выявлены гистогенетические изменения клеток эпителиальной выстилки, происходящие при

формировании маточно-влагалищного тракта в пренатальном периоде онтогенеза у человека.

Впервые предложена гипотеза о формировании дисперсной клеточной системы, клетки

которой являются производными эпителия мочеполового пространства и включены в состав

эпителиальной выстилки маточно-влагалищного тракта.

С

помощью

модифицированного

метода

жидкостной

цитологии

комплексом

морфологических исследований охарактеризован клеточный состав шейки матки в мазках,

взятых с поверхности шейки матки и цервикального канала у женщин репродуктивного

возраста при кольпоскопической картине эктропиона.

5

Теоретическая и практическая значимость работы вытекает из решения вопросов о

механизмах формирования взаимодействия генетически различных видов эпителиев в процессе

развития эпителиальной выстилки органов женского полового тракта. Показано, что в

формировании стыка двух генетически различных видов ткани принимают участие

производные эпителия мочеполового синуса, ввиду чего процесс метаплазии нельзя считать

окончательно доказанным.

Результаты

исследования

способствуют

пониманию

формирования

механизмов

врожденных пороков развития (ВПР) женского полового тракта, так как выявлено, что

перегородка парамезонефральных протоков формирует будущий шеечный канал и на ранних

сроках эмбрионального гистогенеза вносит свой вклад в феномен гетероморфии клеток в

составе канала. Важное значение для понимания механизма ряда патологических состояний

имеет тот факт, что клетки - производные мочеполового синуса, выделенные нами в

дисперсную клеточную систему эпителия шейки матки, участвуют во взаимодействии двух

генетически различных видов ткани.

Предложенный модифицированный метод жидкостной цитологии с элементами

культивирования тканей способствует сохранению свойств клеток, взятых с поверхности шейки

матки и цервикального канала и может быть использован в повседневной практике врачей для

быстрой и точной постановки диагноза.

Показана целесообразность использования цитокератина 20 для изучения так

называемых «резервных» клеток в мазке на онкоцитологию.

Положения, выносимые на защиту:

1.

С

4-й

по

12-ю

недели

эмбрионального

развития

человека

происходит

дифференцировка закладок органов женской половой системы. На ранних сроках гестации

выделены следующие этапы гистогенеза маточно-влагалищного тракта: а) закладка (4-5

недель); б) кранио-каудальный рост эмбрионального материала (5-7 недель); в) выделение

протоков из урогенитальной бластемы (7-8 недель); г) объединение парамезонефральных

протоков и формирование перегородки (8-9 недель); д) региональное взаимодействие с

дорсальной

стенкой

мочеполового

пространства

(10-12

недель);

е)

формирование

анатомических взаимоотношений между органами малого таза (мочевой пузырь, прямая кишка)

– 12-13 недель.

2.

С 13-й по 20-ю недели эмбрионального развития мочеполовое пространство является

связующим звеном в развитии матки и влагалища и определяет градиент линейного

6

перемещения

эпителиев

маточно-влагалищного

тракта.

Гистогенетические

процессы,

происходящие в эпителиальной выстилке мочеполового пространства, протекают в тесном

единстве с таковыми в эпителиальной выстилке парамезонефральных протоков и эпителии

кожного типа формирующегося влагалища.

3.

С 20-й по 25-ю недели мочеполовое пространство не обнаруживается. Между

эпителием целомического происхождения и влагалищным эпителием обнаруживается

переходная зона, эпителиоциты которой являются производными эпителиальной выстилки

мочеполового пространства.

4.

С 25-й по 30-ю недели развития формируется место контакта целомического

эпителия с эпителием кожного типа. Под столбчатыми эпителиоцитами шейки матки в области

«стыка» с влагалищным эпителием, а также на дне шеечных желез обнаруживаются клетки,

которые являются производными эпителиальной выстилки мочеполового пространства.

5.

При кольпоскопической картине эктропиона обнаруживается переходная зона,

которая возникает за счет процессов пролиферации и дифференцировки эпителиоцитов,

являющихся

производными

эпителиальной

выстилки

мочеполового

пространства.

Эпителиоциты переходной зоны экспрессируют цитокератин 20, что характерно для клеток

эпителиальной выстилки мочеполового пространства. Эпителиальная выстилка маточно-

влагалищного тракта по гистогенетическим свойствам является полидифферонной системой,

которая включает в себя производные эпителия парамезонефральных протоков, эпителия

кожного типа и эпителия мочеполового синуса.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность

проведенного

научного

исследования

определяется

достаточным

объемом материала, высоким уровнем современных гистологических, цитологических,

иммуногисто- и иммуноцитохимических методик, обработкой полученного материала

методами статистического анализа.

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практических

конференциях: II всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая

медицина – 2012», секция кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии СЗГМУ им. И.И.

Мечникова (Санкт-Петербург, 2012); на III всероссийской конференции с международным

участием «Профилактическая медицина – 2013», секция кафедры акушерства, гинекологии и

перинатологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2013); на межвузовской

студенческой конференции с международным участием «Мечниковские чтения - 2014», секция

кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова (Санкт-

7

Петербург, 2014); на всероссийской конференции «Актуальные вопросы эмбриологии» (Санкт-

Петербург,

Военно-медицинская

академия

имени

С.М.

Кирова,

2014);

конференции

«Актуальные

проблемы

морфологии:

эмбриональный

и

репаративной

гистогенез,

филогистогенез», посвященной 100-летию со дня рождения чл. - корр. АМН СССР А.Г. Кнорре

(Санкт-Петербург, 2014); конференции « Учение о тканях. Гистогенез и регенерация» (Санкт-

Петербург, Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова, кафедра гистологии с курсом

эмбриологии, 2015). Результаты диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры

акушерства, гинекологии, перинатологии и репродуктологии СЗГМУ имени И.И. Мечникова,

протокол № 1 от 27.08.2014; на заседании кафедры гистологии с курсом эмбриологии Военно-

медицинской академии имени С.М. Кирова, протокол № 17 от 18.09.15.

Личное участие автора в получении результатов

Личное участие автора осуществлялось на всех этапах подготовки диссертационного

исследования, начиная с его планирования, формулирования цели и задач исследования,

определения алгоритма обследования, взятия материала и работы в научно-исследовательской

лаборатории, статистической обработки и анализа полученных данных. Автор принимала

непосредственное участие в подготовке пациенток, выполнении забора эмбриологического

материала, в выполнении забора цитологического материала (мазков). Самостоятельно

исследовала патологоанатомический материал на гистологических, цитофотометрических и

иммуногисто- иммуноцитохимических установках и осуществляла обработку полученных

данных согласно принципам доказательной медицины.

Внедрение результатов исследования

Результаты внедрены в учебный процесс кафедр: гистологии с курсом эмбриологии

Федерального государственного бюджетного военного образовательного учреждения высшего

профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»

Министерства обороны РФ (194175, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6) и

кафедры акушерства и гинекологии имени С.Н. Давыдова ГБОУ ВПО «Северо-Западный

государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» (191015, СПб., Кирочная ул.,

д. 41). Основные положения и практические рекомендации внедрены в клиническую работу

Северо-Западного Лазерного центра (197101, СПб., Ковенский пер., д. 11).

8

Публикации

По теме диссертации опубликовано девять работ из них пять в изданиях,

рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикаций основных результатов диссертаций

на соискание ученой степени.

Структура и объем работы

Работа выполнена на 209 страницах компьютерного текста, состоит из введения, четырех

глав диссертации, включая литературный обзор и результаты исследования, обсуждения,

выводов, практических рекомендаций и приложения. Диссертация содержит 10 таблиц и 98

рисунков. В библиографическом указателе приведены 165 источников, в том числе

95 ─

зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Исследование выполнено в полном соответствии с международными этическими

нормами, изложенными в Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации и

одобрено Этическим комитетом (протокол №9 заседания Локального Этического комитета

ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова от 08 октября 2014 г.). Соблюдены принципы,

регламентирующие

научные

исследования

с

международным

руководством

для

биомедицинских исследований с вовлечением человека Совета международных организаций

медицинских наук

(CIOMS; international ethical guidelines for biomedical research involving

human subject); а также в соответствии с приложением к приказу Минздравмедпрома РФ № 82

от 29.04.1994 г. и приложением № 4 к приказу МЗ РФ № 318 от 04.12.1992г. и с инструкцией по

патологоанатомическому исследованию, утвержденному III съездом Российского общества

детских патологов; Постановлением Правительства Российской Федерации от 24.09.2013 г. №

842 «О порядке присуждения ученых степеней» и ГОСТ 7.0.11-2011 «Диссертация и

автореферат диссертации. Структура и правила оформления».

Методологической основой научной работы явилось последовательное применение

методов научного познания. Работа выполнена в соответствии с принципами и правилами

доказательной

медицины.

В

работе

использованы

клинические,

лабораторные,

инструментальные, физиологические, гистологические, цитологическое, аналитические и

статистические методы исследования.

9

Объектом исследования служили 50 эмбрионов и плодов в возрасте с 4-й по 12-ю

недели развития

и 64 плода в возрасте с 13-й по 30-ю недели развития. Для решения

поставленных задач также произведен забор мазков, взятых с поверхности слизистой оболочки

шейки матки и цервикального канала у 136 женщин репродуктивного возраста. На все виды

исследования получили разрешения этической комиссии СЗГМУ имени И.И. Мечникова (г.

Санкт- Петербург, протокол №3 от 07.03.2013).

Фиксацию материала и приготовление препаратов осуществляли согласно принципам

количественной гистохимии (Данилов Р.К., 1994). Основным фиксатором служила смесь:

формалин-спирт-уксусная кислота в соотношении 3:1:0,3 (Бродский В.Я., 1966). Препараты

изготавливали на микротоме МПС-2, толщина среза – 5-7 мкм.

Забор материала для цитологических исследований производился с помощью

цитощеток. Полученный материал помещали в стерильную среду для культивирования 199М.

Инкубировали материал в той же среде в течение 1-2 сут в термостате при температуре 37°С,

при адекватном поступлении кислорода из кислородного баллона. Приготовление препаратов

осуществляли стандартным способом. В заключении использовали формулировки Всемирной

Организации Здравоохранения (WHO), Лион, 2003; Бетесда (The Betesda System (TBS)), США,

2001; Всемирной Организации Здравоохранения (WHO), 2003.

Окраску гистологических и цитологических препаратов производили гематоксилином

Коуля, Майера и эозином, а также альциановым синим (рН 2,5) и реактивом Шиффа. Для

изучения процессов пролиферации использовались методики: гисто- и цитохимическая реакция

по Фельгену в модификации де Томази, иммуногисто- и иммуноцитохимическая реакция на

ядерный белок Ki-67 (реактив фирмы SPRING BIOSCIENCE - Rabbit Anti-Human Ki-67

Monoclonal Antibody (Clone SP6, США).

Для оценки процессов дифференциации в клетках выявляли гликоген (по Шабадашу),

применяли

иммуногисто-

и

иммуноцитохимические

реакции

на

экспрессию

белка

цитокератина 10 (Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 10 Clone DE-K10, Dako, США),

цитокератина 20 (Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 20 Clone Ks 20.8, Dako, США).

Кроме того, применяли реакцию на экспрессию белков «цитокератинового коктейля» (Anti-

Cytokeratin antibody (CK-cocktail), Abcam, США). В работе руководствовались рекомендациями

и протоколами Д.Э. Коржевского и соавт. (2012).

Статистическую обработку параметров производили согласно рекомендациям Г.Г.

Автандилова (2006) с оценкой среднего арифметического ( ), дисперсии, стандартного,

среднего квадратического отклонения (

, стандартной ошибки (S ), коэффициента

10

вариации (СV) и относительной ошибки

. Для сравнения групп по параметрам

распределений признака рассчитывался уровень статистической значимости (р), величина р

0,05 считалась статистически достоверной.

Результаты исследования и их обсуждение

Морфофункциональная

характеристика

гисто-

и

органогенеза

маточно-

влагалищного тракта человека в пренатальном периоде онтогенеза. На 4-5-й неделе

пренатального

онтогенеза

в

составе

урогенитальной

бластемы

обнаруживаются

парамезонефральный проток (мюллеров каналец, ПМП) и мезонефральный проток (вольфов

каналец, МНП). Эпителиальная выстилка ПМП является производным целомического эпителия

и формируется как инвагинация последнего в толщу первичной почки. Эти данные согласуются

с большинством исследований, выполненных по этой теме (Федорова Н.Н., 1999; Salder T.W.,

1999; Hashimoto R., 2003; Kurita T., 2005; Cai Y., 2009; Fritsh Н., 2013).

Дальнейшее

развитие

сопровождается

кранио-каудальным

ростом

и

сменой

пространственной локализации протоков,

однако развитие ПМП происходит в условиях

тесного взаимодействия с МНП, который, возможно, оказывает индуктивное воздействие на

рост ПМП.

В ходе исследования установлено, что морфогенез по женскому типу развития

характеризуется объединением ПМП с формированием общей перегородки, в которой

обнаруживаются

фигуры

митоза,

свидетельствующие

о

пролиферативной

активности

эпителиоцитов в составе медиальных стенок. Ранее был описан факт полной редукции

перегородки (Волкова О.В., Пекарский М.И., 1976; Carlson B.M., 1999) и формирование общего

маточно-влагалищного канала (Федорова Н.Н., 1995), но это характерно для развития половой

системы по мужскому типу и сопровождается последующей редукцией канала.

Слившиеся ПМП постепенно, с 11-й по 12-ю недели развития, растут по направлению к

мочеполовому пространству (синусу). Выявлено тесное взаимодействие этих эпителиальных

структур.

Изучение

серийных

срезов

13-14

недель

эмбрионального

развития

показало

взаимодействие эпителиальной выстилки мочеполового пространства с эпителиальной

выстилкой объединенных парамезонефральных протоков. При этом установлено, что

эпителиальная выстилка мочеполового пространства формирует инвагинацию эпителия в

11

3

2

а

б

4

1

Рисунок 1 - Мочеполовое пространство 14-15-недельного плода человека (панорамная

микрофотография): а - многослойный эпителий мочеполового пространства б - многослойный

эпителий инвагинации мочеполового пространства; 1 - мочеполовое пространство; 2 - складка

мочеполового пространства; 3 - инвагинация эпителия мочеполового пространства; 4 - связь

мочеполового пространства с мочевым пузырем. Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10,

ок. 10.

Данный факт лежит в основе формирования гетероморфии эпителиальной выстилки

цервикального канала, формируется зона взаимодействия этих эпителиев, определяемая как

«переходная зона». Первые упоминания об этом были сделаны Б.М. Пэттеном (1959), затем

неоднократно повторялись в работах других ученых (Boutin E., 1997; Carlson B., 1999). Однако

этими исследователями было лишь сделано предположение о формирующемся эпителиальном

тяже мочеполового синуса в сторону парамезонефральных протоков, без указания срока

гестации, особенностей взаимодействия и формирования «стыка» на более поздних сроках

развития.

12

сторону объединенных парамезонефральных протоков и на некотором расстоянии эпителии

соприкасаются между собой (рис. 1).

У плодов 20-25 недель развития на серийных гистологических срезах обнаруживается

формирование будущего «стыка» эпителия кожного типа с эпителием целомического

происхождения. Существенная роль в этом взаимодействии отводится многослойному

эпителию, производному мочеполового пространства. Эпителий МПП формирует «переходную

зону» между двумя генетически различными видами эпителия и определяет градиент

перемещения эпителиальных пластов. Именно в области контакта многослойного эпителия

«переходной

зоны»

с

целомическим

эпителием

обнаруживается

более

выраженная

гетероморфия клеток (таблица).

У плодов 25-30-недельного срока развития четко выявляется «стык» эпителия

влагалищной части шейки матки и цервикального эпителия надвлагалищной части шейки

матки. Область «стыка» состоит из столбчатых эпителиоцитов и расположенных под ними

округлых клеток, прилежащих к плотной базальной мембране. Эти клетки диффузно

распределены по всей эпителиальной выстилке канала, их цитоплазма светлая, ядра округлой

формы.

В

области

формирующейся

влагалищной

части

шейки

матки

этот

эпителий

взаимодействует с многослойным плоским неороговевающим эпителием кожного типа.

Расположение указанных клеток в области контакта позволяет высказать предположение о

сохранении своеобразной переходной зоны между двумя видами эпителиальных тканей.

Исходя из учения о клеточно-дифферонной организации тканей (Клишов А.А., 1984;

Данилов Р.К., 2008), базальные эпителиоциты можно отнести к клеточному дифферону

ведущего столбчатого эпителия шейки матки, а последний - к полидифферонной ткани,

имеющей генетически разные и детерминированные источники развития.

Процессы

пролиферации

и

дифференциации

эпителиоцитов

маточно-

влагалищного

тракта

в

пренатальном

периоде

онтогенеза

человека.

Учитывая

формирование морфофункциональной связи матки с внешней средой на сроке 13-14 недель

развития, оценку процессов пролиферации и дифференцировки анализировали начиная с этого

времени. На 13-14-неделях развития индекс метки ядер на белок Ki-67 в базальных

эпителиоцитах МПП в среднем составляет 85%, индекс метки ядер парабазальных

эпителиоцитов - 9%, а в поверхностных эпителиоцитах -

5%. Схожие закономерности

показателей метки обнаружены в клетках инвагинации МПП в сторону объединенных ПМП.

13

20-25 нед

7,69±0,23

7,69±0,23

6,84±0,13

6,84±0,13

7,69±0,76*

7,69±0,76*

5,84±0,16*

5,84±0,16*

7,92±0,15*

7,92±0,15*

6,61±0,31*

6,61±0,31*

Сроки эмбриогенеза

Базальные

эпителиоциты

А клетки

В клетки

А ядра

В ядра

15-16 нед

10,88±0,55

8,21±0,23

9,34±0,32

7,81±0,53

мкм

S мкм²

70,119968

57,262139

мкм

S мкм²

фактор формы

46,4218385

36,726696

46,4218385*

26,772896**

49,240224**

34,2982985**

фактор формы

1,3

1

1

1

1

1

Парабазальные

эпителиоциты

9,41±0,28*

9,41±0,28*

7,46±0,28**

7,46±0,28*

69,5102585*

43,686506*

69,3626**

43,686506*

Таблица - Морфометрическая характеристика эпителиоцитов выстилки МПП у плодов 15-25-недели развития ( ±S )

Примечание: * p 0,5 при сравнении с базальными эпителиоцитами; ** p0,1 при сравнении с базальными эпителиоцитами

А клетки

В клетки

А ядра

В ядра

Поверхностные

эпителиоциты

9,40±0,29*

9,40±0,29**

7,46±0,28**

7,46±0,28*

А клетки

В клетки

А ядра

В ядра

Условные обозначения: А – продольный размер структуры, В – поперечный размер структуры.

14

С учетом гетероморфии клеток шеечного канала, обнаружены следующие

закономерности: в краниокаудальном направлении индекс метки уменьшается примерно в

2 раза (с 90% до 40%); далее в многослойном эпителии индекс метки в базальном слое

эпителиоцитов составил 40%, в парабазальном слое 43%, в поверхностном слое – 43%

(рис. 2).

Рисунок 2 - Эпителий шеечного канала плода 13-14-недель развития. Стрелками отмечен

митоз. Иммуногистохимическая реакция на белок Ki67. Подкраска гематоксилином. Об.

95, ок. 10.

По мере приближения к формирующемуся телу матки и снижения степени

гетероморфии клеточного состава эпителиальной выстилки шеечного канала индекс

метки падает до 23-30%. В области тела матки в апикальной части ее эпителиальной

выстилки этот показатель составляет 10-15%, а в базальном слое 7-8%.

При оценке

иммуногистохимической реакции на цитокератин 20 у плодов человека 13-14 недель

развития обнаружено, что в поверхностных эпителиоцитах мочевого пузыря цитоплазма

клеток равномерно воспринимает реактив.

Однако эта метка относительно редкая и составляет в среднем 30%, в то время как

высокий индекс метки в цитоплазме клеток обнаружен в области мочеполового

пространства, преимущественно в поверхностном слое эпителиальной выстилки.

Исследование результатов гистохимических и иммуногистохимических реакций у

плодов человека 15-20 недель развития выявило типичные закономерности, ранее

описанные на сроке 13-14 недель.

15

Подсчет индекса метки на белок клеточной пролиферации Ki67 у плодов 20-25-

недель развития показал, что практически 100% метки локализовано в ядрах базальных

эпителиоцитов

влагалища (эпителий кожного типа). В эпителиальной выстилке тела

матки индекс метки ядер составил 7%; в то время как на дне маточных желез - 30%. В

переходной зоне индекс метки обнаружен в единичных клетках, локализованных

преимущественно в базальном и поверхностном слоях эпителиальной выстилки.

У плодов 25-30-недель развития обнаружено, что в эпителиальной выстилке тела

матки метка ядер на белок клеточной пролиферации Ki 67 практически не

обнаруживается, в то время как на дне маточных желез этот индекс составляет 7%. В

эпителиальной выстилке цервикального канала индекс метки ядер составляет 20%. В

области контакта с влагалищным эпителием обнаруженные в базальном слое округлые

клетки все воспринимают указанные реактив. Индекс метки базальных эпителиоцитов

влагалища уменьшается в 4 раза и составляет в среднем 20%.

Морфофункциональная

характеристика,

процессы

пролиферации

эпителиоцитов шейки матки в мазке на онкоцитологию у женщин репродуктивного

возраста при кольпоскопической картине эктропиона. С целью уточнения клеточных

источников развития эпителиоцитов в мазках, полученных с поверхности шейки матки и

цервикального

канала,

проведено

цитофотометрическое,

иммуноцитохимическое

исследование. Так, при обработке мазков на маркер ядерной пролиферации Ki-67 метка

обнаруживается в ядрах эпителиоцитов так называемого «метапластического эпителия».

Выявлено, что метка присутствует преимущественно в незрелых «резервных клетках», ее

индекс составляет

70-83%. Эти данные коррелируют с данными гистограмм, оценки

среднего содержания ДНК в ядрах эпителиоцитов выделенных в составе эпителия

«переходной зоны» шейки матки. В цитоплазме этих эпителиоцитов идет синтез общего

белка, количество которого практически не отличается от такового в I и II

фазы

менструального цикла (рис. 3).

Экспрессия цитокератина 20 обнаруживается в цитоплазме эпителиоцитов,

выделенных из состава «переходной зоны» шейки матки. Установлено, что метка

обнаруживается как в зрелых, так и незрелых формах так называемых «резервных

клеток», но чаще в незрелых. Обращает на себя внимание отсутствие метки в цитоплазме

эпителиоцитов, выделенных в составе многослойного плоского вагинального эпителия и

цилиндрического эпителия цервикального канала (рис. 4)

16

0,4

0,35

0,3

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0

ЭПИТЕЛИОЦИТЫ

ЭПИТЕЛИОЦИТЫ

ЭПИТЕЛИОЦИТЫ

ВЛАГАЛИЩНОГО

"ПЕРЕХОДНОЙ ЗОНЫ"

ЦЕРВИКАЛЬНОГО

ЭПИТЕЛИЯ ШЕЙКИ

ШЕЙКИ МАТКИ

ЭПИТЕЛИЯ ШЕЙКИ

МАТКИ

МАТКИ

I ФАЗА МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА

II ФАЗА МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА

Рисунок 3 – Динамика изменения содержания общего белка в эпителиоцитах, выделенных

в составе эпителиев шейки матки в цитологическом мазке.

Рисунок

4

-

Цитоплазматическая

метка

на

экспрессию

цитокератина

20

в

«метапластических эпителиоцитах» (указана стрелками). Мазок с поверхности шейки

матки и цервикального канала. Подкраска гематоксилином. Об. 40, ок. 10.

Таким образом, эпителиоциты, выделенные из состава эпителия «переходной

зоны» шейки матки, следует отнести к эпителиоцитам - производным мочеполового

пространства. Соответственно этому, эпителиальную выстилку шейки матки предлагается

17

рассматривать как полидифферонную систему, в состав которой входят клетки

целомического происхождения (цервикальный эпителий), клетки эктодермального

происхождения (вагинальный эпителий, эпителий кожного типа) и клетки, производные

мочеполового пространства. Последние являются производными «эмбрионального»

мочеполового пространства и

по характеру локализации могут быть отнесены к

дисперсной клеточной системе.

ВЫВОДЫ

1.

На 4-5-й неделе эмбриогенеза человека закладываются парамезонефральные

протоки, обнаруженные в урогенитальной бластеме. Источником их развития является

целомический эпителий. Парамезонефральные и мезонефральные протоки растут в

сторону мочеполового пространства в кранио-каудальном направлении.

2.

С

6-7-й

недели

внутриутробного

развития

определяется

половая

дифференцировка закладок органов женской половой системы. Формируется наружная

оболочка

парамезонефральных

протоков и

наблюдается

секреторная

активность

эпителиоцитов. С 8-9-й недели происходит сближение парамезонефральных протоков и

объединение их медиальных стенок в пространстве между прямой кишкой

и

мочеполовым синусом.

3.

На 10-11-й неделе мезонефральный проток встраивается в дорсальную стенку

мочеполового пространства в месте непосредственной близости от латеральных стенок

парамезонефральных протоков. При этом не обнаруживается слияния последних со

стенкой

мочеполового

синуса.

Эпителиоциты

мочеполового

пространства

и

формирующегося мочевого пузыря экспрессируют цитокератин 20.

4.

С 13-й по 20-ю недели эмбрионального развития формируется шеечный канал

матки, эпителиальная выстилка которого взаимодействует с таковой мочеполового

пространства.

Эпителиоциты

последнего

взаимодействуют

с

эпителиоцитами

парамезонефральных протоков и обнаруживаются на всем протяжении шеечного канала

вплоть до формирующегося просвета тела матки. При этом эпителиальная выстилка

шейки матки характеризуется выраженной гетероморфией эпителиоцитов, степень

которой уменьшается в каудо-краниальном направлении и в области тела и дна матки

представлена однослойным столбчатым эпителием.

5.

С 20-й по 30-ю недели эпителий мочеполового пространства формирует

переходную зону и постепенно редуцируется. Эпителиальная выстилка маточно-

влагалищного тракта представлена эпителием целомического типа, который в области

18

наружного

зева

взаимодействует

с

влагалищным

эпителием

и

формирует

«гистологический эпителиальный стык».

6.

В области «стыка» под столбчатыми эпителиоцитами на базальной мембране

находятся клетки - производные эпителия мочеполового пространства. Последние

дисперсно расположены по всей эпителиальной выстилке шеечного канала, а

также

обнаруживаются на дне шеечных желез.

7.

При кольпоскопической картине эктропиона определяется переходная зона,

клетки которой экспрессируют цитокератин 20, характеризуются более высоким уровнем

пролиферации по сравнению со столбчатыми эпителиоцитами и клетками многослойного

плоского влагалищного эпителия.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.

Изученные закономерности гистогенеза маточно-влагалищного тракта в

пренатальном онтогенезе человека являются основой для изучения особенностей

формирования пороков развития органов женского полового тракта.

2.

Предложенный

модифицированный

метод

приготовления

мазка

на

онкоцитологию с использованием среды 199М целесообразно применять в повседневной

практике врачей акушеров-гинекологов и патоморфологов для своевременной и точной

диагностики доброкачественных заболеваний шейки матки.

3.

Постановка реакции на экспрессию цитокератина 20 может быть применена в

иммуноцитохимических методах диагностики доброкачественных заболеваний шейки

матки, так как этот белок

является маркером идентификации дисперсной клеточной

системы в мазках на онкоцитологию.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Татарова, Н.А. Роль кольпоскопии в ранней диагностике патологии шейки матки / Н.А.

Татарова, М.Ю. Жеглова // Сборник материалов конференции «Профилактическая медицина -

2011». — Санкт-Петербург: СЗГМУ им И.И. Мечникова, 2011. — С. 114, 78.

2. Жеглова, М.Ю. Клинико-морфологическое исследование эпителиев шейки матки в

раннем эмбриогенезе человека / М.Ю. Жеглова // Морфология. — 2013. — Т. 144. — №

5. — С. 77-78.

3. Жеглова, М.Ю. Морфофункциональные особенности строения женской половой

системы в эмбриогенезе человека/ М.Ю. Жеглова // Сборник материалов конференции

19

2013. — С. 112.

4. Жеглова,

М.Ю.

Дифференцировка

эпителиоцитов

мезонефрального

и

парамезонефрального протоков в эмбриогенезе человека / М.Ю. Жеглова // Гены и

клетки. — 2014. — Т. IX. — № 2. — С. 87—92.

5. Жеглова, М.Ю. Морфофункциональная характеристика эпителиев шейки матки в

раннем эмбриогенезе человека / М.Ю. Жеглова // Морфология. — 2014. — Т.145. — №3.

— С. 74.

6. Данилов, Р.К. Формирование гетерогенности эпителиальной выстилки маточно-

вагинального тракта в пренатальном развитии у человека / Р.К. Данилов, М.Ю. Жеглова //

Сборник научных статей, посвященный 100-летию со дня рождения чл.-корр. АМН СССР

профессора

Алексея

Георгиевича

Кнорре

«Актуальные

проблемы

морфологии:

эмбриональный и репаративный гистогенез, филогистогенез». Под ред. д.м.н., проф. Э.И.

Вальковича и д.м.н., доц. А.В. Дробленкова. — Санкт-Петербург: СПбГПМУ, 2014. — С.

59-61.

7. Жеглова, М.Ю. Эмбриональное развитие эпителиальной выстилки шейки матки / М.Ю.

Жеглова // Материалы VII регионального научного форума «Мать и Дитя». — М.: МЕДИ

Экспо. — 2014. — С. 217-219.

8. Жеглова,

М.Ю.

Эмбриональные

источники

развития

«резервных

клеток»

эпителиальной выстилки шейки матки / М.Ю. Жеглова, Р.К. Данилов // Морфология. —

2015. — Т. 148. — № 5. — С. 77—81.

9. Жеглова, М.Ю. Цитохимическая характеристика реактивных изменений эпителиоцитов

шейки матки при эктропионе / М.Ю. Жеглова, Р.К. Данилов // Вопросы морфологии XXI

века. Сборник научных трудов: «Учение о тканях. Гистогенез и регенерация». Под ред.

И.А. Одинцовой, С.В. Костюкевича. — СПб.: ДЕАН, 2015. — Вып. 4. — С. 122-127.

10.

Жеглова, М.Ю. Развитие дисперсной клеточной системы эпителиальной выстилки

шейки матки в пренатальном онтогенезе у человека / М.Ю. Жеглова, Р.К. Данилов // Гены

и клетки. — 2015. — Т. X. — № 2. — С. 116—120.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВПР – врожденные пороки развития

ПМП – парамезонефральные протоки

МНП – мезонефральные протоки

МПП – мочеполовое пространство

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота

20

«Профилактическая медицина - 2013». — Санкт-Петербург: СЗГМУ им И.И. Мечникова,



Похожие работы:

«ЗЕМЛЕМЕРОВА ЕЛЕНА ДМИТРИЕВНА МОЛЕКУЛЯРНАЯ ФИЛОГЕНИЯ И ФИЛОГЕОГРАФИЯ КРОТОВ ТРИБЫ TALPINI (MAMMALIA: TALPIDAE) 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре зоологии позвоночных биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Научный руководитель: кандидат биологических наук Банникова Анна Андреевна Официальные оппоненты: доктор...»

«Колесникова Алиса Станиславовна АНОКТАМИНЫ ВКУСОВЫХ КЛЕТОК МЫШИ: КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ И ЛОКАЛИЗАЦИЯ 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Пущино – 2016 ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Идентификация ионных каналов, вовлеченных в сигнальные процессы во вкусовых клетках млекопитающих, является актуальной проблемой, поскольку молекулярные механизмы детекции вкусовых стимулов и принципы...»

«ЖАВОРОНКОВА Надежда Викторовна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАРАЗИТОФАУНЫ РЫБ В ВОДОЕМАХ РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ Специальности: 03.02.11 – паразитология 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2016 Работа выполнена на кафедре зоотехнии и биологии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования Рязанский государственный агротехнологический университет имени П.А....»





 
© 2015 www.z-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.